| AbXpress™重组蛋白表达纯化

鲁纳科拥有丰富的重组蛋白研发及生产经验，强大的技术平台、先进的生产设备以致力于为客户提供从质粒构建、重组蛋白表达与纯化及规模化生产的一站式重组蛋白研发生产服务，满足客户不同实验或项目需求。

· 蛋白表达系统

常用的重组蛋白表达系统主要有：原核表达系统、哺乳动物表达系统、酵母表达系统、昆虫表达系统等以满足不同的需求。 原核表达系统是通过原核生物来获得外源蛋白的体系，主要包括：大肠杆菌表达、枯草芽孢杆菌表达、链霉菌表达等，其中大肠杆菌系统应用最为广泛，也是鲁纳科目前提供的主要服务之一。


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原核表达系统

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哺乳动物表达系统

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酵母表达系统

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昆虫表达系统

应用适用于结构简单、后修饰要求不高的蛋白表达。适合表达对翻译后修饰要求严格的蛋白，如某些治疗性蛋白。适用于需要一定程度翻译后修饰的蛋白质。适合于需要复杂糖基化和其他翻译后修饰的蛋白质
优势遗传背景清楚、成本低、表达量高、稳定性好、抗污染能力强。表达的重组蛋白接近人源构象，适合研究某些特定蛋白功能。表达量高，可诱导，糖基化机制接近高等真核生物。组蛋白具有完整的生物学功能，如蛋白的正确折叠、二硫键的搭配。
局限表达的蛋白质可能形成包涵体，需要额外的复性步骤。表达量相对较低，成本较高，有时可能导致病毒感染。部分蛋白产物易降解，表达量不可控。外源蛋白表达受极晚期病毒启动子调控，可能伴随细胞死亡


· 原核纯化标签选择

蛋白标签是广泛用于蛋白质表达和纯化的工具。通常将这些标签放在目的蛋白的N-或C-端，以便在蛋白质表达和纯化过程中通过自身的独特性质进行快速识别。选择合适的蛋白标签不但可以有利于蛋白的纯化，还能够促进蛋白的可溶性，但是同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。主要常见的是下表中的几种：

融合

标签

大小（KD）功能

优点

缺点

是否切除

His0.84

有利纯化，能纯化可溶性/包涵体蛋白

1. 对蛋白不会产生功能影响

2. 纯化步骤简便，条件温和

不适合易氧化蛋白混或膜蛋白的纯化

标签小，对蛋白无影响

GST

26

增强蛋白可溶性，仅能纯化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白

1. 可在不同的宿主中表达，适用范围广；

2. 很好保留了蛋白的抗原性和生物活性，提高外原蛋白的稳定性

3. 高特异性，纯化方便且温和

1. 分子量较大，可能会影响蛋白质的功能和下游实验；

2. 如果蛋白不可溶，很难用变性的方法纯化

标签较大，影响较大
MBP44.4增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白

1. 简单亲和纯化即可实现

2. 增加蛋白表达量和蛋白稳定性

3. 促进蛋白的可溶性和正确折叠

标签较大，对蛋白的结构/功能会有一定影响

NusA

55

增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白

可以提高蛋白质的溶解性

1.与其它标签如His标签联用；

2. NusA对蛋白下游应用会有影响

SUMO11.2增强可溶性，屏蔽毒性蛋白

1. 对热和蛋白酶具有耐受性，有助于保持目的蛋白的稳定性

2. 切割不存在任何氨基酸的残留

1. 标签去除困难

2. 纯化效率低，影响蛋白纯度

· 服务流程

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· 服务亮点

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项目经验丰富

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完备表达体系

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多种纯化技术

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高质量标准

| 原核表达详情—重组蛋白

服务阶段服务内容服务时间服务结果
Ⅰ：售前沟通及订单确定---
Ⅱ：重组蛋白基因序列确定

1.查找重组蛋白基因序列

2.密码子优化

3.目的片段基因合成

1-2周

-

Ⅲ：载体构建

1. 载体线性化，与目的片段连接

2.重组质粒转化至克隆感受态细胞

3.菌落PCR及序列验

2-3周构建载体甘油菌及测序报告
Ⅳ：重组蛋白表达纯化

1.质粒转化至表达感受态细胞

2.IPTG诱导表达

3.重组蛋白纯化（Ni柱、protein G等）

4.大量纯化交付产品

2-3周重组蛋白浓度为xx
Ⅴ：重组蛋白表征

1.SDS-PAGE

2.Western – Blotting（选做）

2.HPLC（选做）

3.BLI（选做

2周核酸电泳图

Ⅵ：冷链交付

-1周（视情况）-

| 原核表达详情—VHH

服务阶段服务内容服务时间服务结果
Ⅰ：售前沟通及订单确定---
Ⅱ：载体构建

1.VHH基因合成

2. 载体线性化，与VHH片段连接

3.重组质粒转化至克隆感受态细胞

4.菌落PCR及序列验证

2-3周

构建载体甘油菌及测序报告

Ⅲ：VHH表达纯化

1.质粒转化至表达感受态细胞

2.IPTG诱导表达

3.重组蛋白纯化（Ni柱、protein G等）

4.大量纯化交付产品

2-3周

重组蛋白浓度为x

Ⅳ：VHH表征

1.SDS-PAGE

2.Western – Blotting（选做）

2.HPLC（选做）

3.BLI（选做）

2周分析报告

Ⅴ：冷链交付

-

1周（视情况）-

微信

电话

18910120258

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